2，3-二氨基萘测富硒乳酸菌四价硒吸光度变化？

测亚硒酸钠中剩余硒氧离子，四价硒
方法160ul 0.5M HCl ，8 0ul 0.1M EDTA，40ul 0.1M NAF，40ul 0.1M 草酸钠 于2ml微管中，混匀 再加入500ul 菌上清液，200ul 0.1%的DAN，40摄氏度孵育40min，用环己烷萃取，取有机相与96孔板，测377nm的吸光度。

萃取总是分三层，上清吸光度无变化，求指点

该回答引用chatgpt:
根据你提供的信息，你正在使用2,3-二氨基萘法测定富硒乳酸菌中的四价硒含量。但是在进行萃取时，总是出现三层分离现象，并且上清液的吸光度没有变化。这可能是由于以下原因导致的：

萃取剂体积不足或者混匀不均：确保在进行萃取时，加入的萃取剂体积足够，能够与样品充分混匀，以便有效地提取目标物质。如果体积不足或者混匀不均，可能导致上清液中的目标物质无法充分溶解或者分散，从而导致吸光度没有变化。
萃取剂的选择不当：不同的样品可能需要不同的萃取剂来提取目标物质。在选择萃取剂时，要考虑到样品的性质和目标物质的特性，并进行合适的优化。可能需要尝试不同的萃取剂来获得更好的结果。
萃取温度不适当：在进行萃取时，温度对提取效果有影响。可能需要优化萃取温度，确保在合适的温度下进行萃取，以便目标物质能够充分溶解或者分散。
萃取时间不足：萃取时间也对提取效果有影响。可能需要尝试不同的萃取时间，确保足够的时间用于提取目标物质。
样品性质影响萃取效果：不同样品的性质可能会影响萃取效果。可能需要针对具体样品的性质进行优化，例如调整样品的pH值、浓度等，以获得更好的萃取效果。
建议你仔细检查实验操作步骤、萃取剂的选择、温度和时间的设置，并根据实际情况进行优化，以获得更准确的测定结果。如果问题仍然存在，请咨询专业的实验技术人员或者相关领域的专家以获得进一步的指导。