目前在HCT-8(人结直肠癌细胞)细胞上进行转染,使用的是PEI和turbofect这两种转染试剂,但是转染效率都不高,该怎么办?目前转的是带EGFP标签的质粒,通过看荧光,发现荧光较弱。同时,与293T细胞相比,更显得荧光弱。如何优化?或者说用什么试剂比较好?
尝试使用其他的转染试剂:除了PEI和turbofect,还有其他的转染试剂可供选择,如Lipofectamine 3000、PolyJet、FuGENE HD等。每种试剂都有其独特的特点,因此可以尝试使用其他试剂进行转染,并比较不同试剂的转染效率。
优化质粒浓度:质粒浓度过低或过高都可能影响转染效率。一般来说,质粒的浓度应该在0.1-1 μg/μl之间。可以尝试不同浓度的质粒进行转染,并比较其转染效率。
优化细胞密度:细胞密度也会影响转染效率。一般来说,细胞密度应该在80%-90%的一层细胞上进行转染。过高或过低的细胞密度都可能降低转染效率。
优化转染时间:转染时间应该在4-6小时之间。过短的转染时间可能导致转染效率降低,而过长的转染时间则可能对细胞产生毒性影响。
尝试使用启动子更强的质粒:EGFP标签的质粒可能是一个比较弱的启动子,可以尝试使用启动子更强的质粒,例如CMV启动子、SV40启动子等。
尝试进行筛选:可以使用筛选药物,如G418、puromycin等,筛选转染后表达目标基因的细胞,从而提高转染效率。